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拜發甘油檢測 酶法分析試劑盒

簡要描述:

拜發甘油 酶法分析試劑盒
酶法分析試劑盒(紫外分光光度法)此法適用于檢測食品(啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒)、化妝品、藥品(溶液、栓劑)、紙板、煙草及生物制品中的甘油。

更新時間:2020-11-12

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拜發甘油檢測 酶法分析試劑盒

拜發甘油檢測 酶法分析試劑盒

 

甘油檢測試劑盒

(酶學試劑盒)

訂貨號:10148270035
產品名稱:甘油(Glycerol )
產品英文名稱:Glycerol
包裝:Ca.3 x 11 tests
產品介紹:如下
產品說明:Glycerol (用于檢測食品中的甘油)

 

酶法分析試劑盒(紫外分光光度法)

RIDASCREEN(產品編號:0 414 433)      30次檢測

1. 甘油試劑盒簡介

酶法分析試劑盒(紫外分光光度法)此法適用于檢測食品(啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒)、化妝品、藥品(溶液、栓劑)、紙板、煙草及生物制品中的甘油。

2.  甘油試劑盒原理

甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化為3-磷酸甘油酯,ATP轉化為ADP; 反應式

                GKGlycerol﹢ATP           L-glycerol-3-phosphate﹢ADP

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可與PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯; 反應式

           PK ADP﹢PEP          ATP﹢Pyruvate

 

丙酮酸酯在L-乳酸酯脫氫酶的作用下可被NADH還原為L-乳酸酯,NADH被氧化為NAD; 反應式

                  L-LDH

Pyruvate﹢NADH﹢H       L-lactate﹢NAD

 

被氧化的NADH的量取決于甘油的量,NADH的吸光度值可在334,340及365nm下測量。

 

3.  試劑盒內容物

----瓶1共有3瓶,每瓶約有2g輔酶及緩沖液的混和物,包括:甘氨酰甘氨酸緩沖液, PH約7.4; NADH約7mg;ATP約22mg;PEP-CHA約11mg;硫酸鎂

----瓶2約0.4ml懸浮物,包括:

丙酮酸激酶,約240U; L-乳酸酯脫氫酶,約220U

----瓶3約0.4ml甘油激酶懸浮物,約34U

----瓶4為甘油檢測對照溶液(甘油檢測對照溶液可不需要計算結果),此溶液使用時不需稀釋。(效期見標簽)

 

4.  檢測溶液的制備 (10次)

----取出1瓶瓶1, 用11ml重蒸水溶解,使用時此溶液需在20-25℃持續回溫約10分鐘

----瓶 2不需稀釋

----瓶 3不需稀釋

 

5.  操作者應該注意之事項

使用前請仔細閱讀,中文翻譯件僅供參考

 

----瓶1約含500mg碳酸鈉,應避免接觸皮膚和呼吸器官,其他用于甘油檢測的試劑不具有危險性

----實驗之后,用過的試劑可作為實驗室廢料處理,但必須在當地法規允許的前提下

 

6.  儲存條件

----瓶 1在2-8℃下保存(見標簽),溶液1在2-8℃下可保存4天,溶液1使用前需回溫至20-25℃

----瓶2及3在2-8℃下保存(見標簽)

 

7.  樣品處理

----直接取用無色,透明,中性的溶液或按稀釋表格稀釋后進行檢測,體積為2.000ml

----過濾混濁溶液

----除去樣品溶液中的二氧化碳氣體

----加入氫氧化鈉或氫氧化鉀來調節酸溶液的PH值約為8

----對于深顏色的樣品溶液可不需稀釋或者用PVPP或酰胺配成較高濃度的溶液如:1g/100ml

----粉碎或均質固體和半固體樣品,用水抽提或溶解,而后過濾,通過Carrez澄清液可脫去其中的混濁物或色素

----用Carrez試劑可脫去樣品中的蛋白質

----用熱水抽提樣品中的脂肪(抽提溫度需在脂肪的溶解度之上),冷卻后可分離出脂肪,將余下物質轉移至容量瓶中并加水至刻度,冰浴15分鐘而后過濾,熱水抽提后用Carrez溶液澄清

 

8.  過程

1.  波長:340nm,Hg365nm或Hg334nm

2.  比色杯:光徑1.0cm

3.  溫度:20-25℃

4.  體積:3.020ml

5.  對照空氣(光路上無比色杯)或對照水讀取讀數

6.  樣品溶液:1-40ug甘油/檢測(體積為0.100-2.000ml樣品體積)

7. 具體操作見如下表格

移液

空白(ml

樣品(ml)

溶液1

樣品溶液

重蒸水

懸浮物2

1.000

-

2.000

0.010

1.000

0.100

1.900

0.010

混和,直至前反應完全反應后,約5-7分鐘,讀取吸光度值A1,而后加入下列物質:

懸浮物3

0.010

0.010

混和,等反應進行完全后(約5-10分鐘),立即讀取樣品和空白的吸光度值A2

如果在15分鐘后反應尚未停止,則在2分鐘的間隔內繼續讀取讀數,直至此值不再變化。

 

分別測樣品與空白的吸光度值差,而后用樣品吸光度值差減去空白吸光度值差可以得到如下公式

△A=(A1 ―A2Sample―(A1 ―A2blank

 

若想得到一個足夠準確的結果,則測得的吸光度的單位至少為0.100單位。

 

如果吸光度值差△A在334及340nm下測得的值高于1.000或在365nm下測得的值高于0.500,如此則表明樣品溶液中甘油的濃度較高。

需根據稀釋表格進行樣品的稀釋

 

9.  計算

根據以下公式計算濃度

V×MW

C=-----------------------×△A(g/l)

ε×d×v×1000

 

V=體積(ml)

V=樣品體積(ml)

MW=被檢測物質的摩爾質量

D=光徑(cm)

ε=NADH的消光系數

340nm=6.3(1×mmol-1×cm-1

Hg365nm=3.4(1×mmol-1×cm-1

Hg334nm=6.18(1×mmol-1×cm-1

 

甘油含量計算遵循如下公式

3.020×92.1

C=----------------------------×△A

ε×1.00×0.100×1000

2.781

=----------------×△A(g甘油/l樣品溶液)

ε

如果樣品溶液是稀釋使用的,在計算結果時需乘以稀釋系數F。

當分析固體或半固體時,測量前需稱一定重量配制樣品溶液,其結果需按下式計算

C 甘油(g/l樣品溶液)C甘油 =--------------------------×100(g/100g)

W 甘油(在樣品溶液中)

 

10. 檢測操作說明

被檢樣品中甘油含量在1ug至40ug之間。

為了得到一個足夠的吸光度值差,樣品溶液的濃度稀釋在0.04g/L至0.4g/L之間。

 

稀釋表格

每升樣品溶液中甘油估計量

 

用水稀釋

 

稀釋倍數

﹤0.4g

0.4-4g

4.0-40g

﹥40g

-

1﹢9

1﹢99

1﹢999

1

10

100

1000

如果測得的吸光度值△A較低,例如低于0.100,則樣品溶液需重新配制,可由下列幾種解決方法

1. 可多稱出些樣品或不要過分稀釋。

2. 加入到比色杯中的溶液體積可增加至2.000ml,當然為了得到相同的體積(樣品和空白),加入的水的體積就要相應減少。所加入的新溶液的體積在計算時是要考慮進去的。

 

11. 技術信息

加入懸浮物2(PK/L-LDH)后等待前反應進行完全后是非常必要的。

 

12. 特性

此法特異性適于甘油的檢測。

 

13. 靈敏度和檢測限

1. 較小的吸光分辨率為0.005個吸光單位,相應的樣品體積為2.000ml,340nm下測量,則樣品的甘油濃度為0.1mg/L;若樣品體積為0.100ml,則樣品的甘油濃度為2mg/L。

2. 340nm下,吸光度值差為0.020可導出檢測限為0.4mg/L,相應的體積為2.000ml。

 

14. 線性

從1ug甘油/檢品(0.4mg甘油 /L樣品溶液,樣品溶液V=2.000ml)到40ug甘油/檢品(0.4g甘油/L樣品溶液,樣品V=0.100ml)

 

15. 準確性

用同一樣品溶液做平行測定時,其吸光度值差會有0.005至0.010的差異,樣品體積為0.100ml,340nm下測量,相應的甘油濃度約為2-5mg/L;若樣品是經過稀釋的,則在計算結果時需乘以稀釋倍數。

 

16. 干擾信息來源

ATP和PEP的緩慢水解同NADH的緩慢氧化均可導致緩慢的蠕變反應;空白和樣品的吸光度值可不必逐一立即檢測。

 

17. 檢測過程中的干擾

1. 根據過程中所給定的時間甘油若能轉化完全,則可斷定沒有干擾發生。

2. 反應結束后,可加入一些甘油重新檢測(定性或定量):如果加入標準物質后,吸光度值會隨之改變,則可斷定沒有干擾發生。

3. 操作過程中的錯誤和干擾可通過兩個樣品體積的平行實驗測得(如0.100ml和0.200ml):測得的吸光度值差應與樣品體積成比例關系。

當測定固體樣品時,可稱取不同質量(如1g和2g)于同一100ml容量瓶中,測得的吸光度值差及樣品的質量應與樣品的體積成比例關系。

4. 樣品所含物質帶來的可能干擾可通過加入內標來控制:除去樣品、空白及標準的檢測外,樣品加檢測對照溶液也要檢測的,測得的吸光度值差可計算干擾。

5. 通過回收試驗可測定可能的損失:分別測定加入標準與不加入標準的樣品,在誤差范圍之內可定量測定附加物。

 

18.  Carrez試劑的澄清作用

----移取液體樣品于盛有60ml重蒸水的100ml容量瓶中或稱取足夠重量的樣品于100ml容量瓶中

----加入60ml重蒸水

----仔細加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液(85mM,3.60gK4Fe(CN)6*3H2O/100ml)和5ml Carrez-Ⅱ-溶液(250mM,7.20gZNSO4*7H2O/100ml)

----用氫氧化鈉調節溶液PH于7.5-8.5,加入每一溶液后需充分混和,加水至容量瓶刻度,混和并過濾

 

19.  應用舉例

1.果汁中甘油的檢測

----稀釋樣品其濃度約在0.4g/L以下(見稀釋表格)

----過濾混濁果汁,取用透明或淡色溶液用于檢測

 

當分析深色果汁時(如:草莓汁和紅葡萄汁)需要先脫色

具體操作

----在10ml果汁中加入0.1g酰胺粉末或PVPP

----攪拌1分鐘后過濾

----取透明溶液用于檢測,該溶液可帶有輕微顏色

 

2.酒中甘油的檢測

----根據稀釋表格將樣品進行稀釋

----實際上紅酒不需脫色也可進行檢測

 

3.啤酒中甘油的檢測

----取5-10ml啤酒用玻璃棒攪拌約1分鐘,除去其中的二氧化碳氣體

----根據稀釋表格稀釋脫去二氧化碳氣體后的樣品

 

4.煙草制品中甘油的檢測

----充分混合并絞碎樣品

----準確稱取1g樣品于100ml容量瓶中

----加入約70mL水磁力攪拌約1小時20-25℃下,而后加水至刻度,混和并過濾

----移取25ml濾液于50ml容量瓶中

----加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液,5ml Carrez-Ⅱ-溶液及10ml氫氧化鈉溶液,在加入每一溶液后均需充人混和

----加水至刻度混和并過濾,取濾液用于檢(0.100ml-0.500ml)

 

5.化妝品中甘油的檢測

 

6.發酵產品及生物培養基中甘油的檢測

----置樣品(可先經過離心)于80℃水浴中15分鐘以停止酶的反應

----離心并取上層溶液(可根據稀釋表格稀釋)用于檢測

----另外可用高氯酸或Carrez溶液脫除蛋白質

 

瓊脂培養基需先均質,而后按以上方法進行操作。

拜發甘油檢測 酶法分析試劑盒

 

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